viernes, 4 de noviembre de 2011

Práctica 3: Digestión de la albúmina por “pepsina industrial”.

https://docs.google.com/document/d/1EIVUZP6gzCe0xi2JV8WQzKhfff-X62keSGr4ArvwRYc/edit?hl=es#

Universidad Nacional Autónoma de México
Colegio de Ciencias y Humanidades
Plantel sur
Práctica 3: Digestión de la albúmina por “pepsina industrial”.
Integrantes:
Contreras Flores Ericka Hazzel



García Sánchez Diana Ivonne
Pérez Morales Dulce María
Quiroz Rojas Marisol
Biologia III
Profa. María Eugenia Tovar
Grupo: 523



Digestión de la albúmina por “pepsina industrial”.


Preguntas generadoras:
1.       ¿Cómo actúa la pepsina sobre las proteínas?
2.       ¿Como están formadas las proteínas?
3.       ¿Qué es la pepsina?
4.       ¿Cual es el papel que desempeñan las proteínas del alimento, en los animales?
5.       ¿Por qué es necesario que se digieran las proteínas del alimento?
6.       ¿Qué es la hidrólisis de una proteína?
7.       ¿Que papel desempeñan el ácido clorhídrico al actuar sobre la pepsina?



Hipótesis:
La pepsina es una pro-enzima inactiva, que al contacto con el ácido clorhídrico se convierte en una enzima activa que digiere a las proteínas, degradando así en sus unidades mas pequeñas que son los aminoácidos.


Introducción:


La pepsina es un enzima digestiva que se segrega en el estómago, su función principal es degradar las proteínas en el estómago donde como producto obtenemos polipéptidos  y aminoácidos; Durante la digestión de las proteínas (polímeros de aminoácidos) se hidrolizan los enlaces peptídicos de estas moléculas.
Una reacción característica de los polipéptidos es la reacción de Biuret, las
proteínas y los aminoácidos no dan positiva esta reacción. Sin embargo no es la única enzima que se encuentra en el estómago, también podemos encontrar la tripsina y la quimo tripsina.
Cabe mencionar que para que la pepsina pueda actuar, necesita de una coenzima que en esté caso sería el HCl que actúa sobre el pepsinógeno. La pepsina al igual que las otras enzimas necesitamos mantenerla a temperatura corporal  (entre 37 y 40°C) para que actúe, ya que a una temperatura más elevada, la enzima, al ser una proteína se desnaturalizaría.
La clasificación en la que se encuentra  es una proteasa. Aún así la pepsina es más activa con un pH de entre 2 y 4. y se desactiva con un pH superior a 6. Corta a los aminoácidos Fenilalanina (Phe), Tirosina (Tyr) y al Triptófano (Trp)en los grupos aminos.
El jugo gástrico, elaborado por las glándulas de la mucosa del estómago, contiene ácido clorhídrico libre y dos enzimas: quimosina y pepsina. En realidad ambas son secretadas como proenzimas inactivas, y en presencia del ácido clorhídrico se transforman espontáneamente en enzimas activas.


Objetivos:


-Identificar la acción de la pepsina sobre las proteínas
-Identificar los productos de la acción de la pepsina sobre las proteínas
-Comprender la acción de los jugos gástricos en la digestión química del alimento
-Conocer como se puede activar una enzima


Material
1 vaso de precipitado de 100ml
papel filtro
1 embudo
1 probeta de 100ml
una gradilla
4 tubos de ensayo
4 probetas de 10ml
Gasas


Material biológico:
Claras de huevo


Sustancias:
Ácido clorhídrico
Reactivo de Biuret
Pepsina


Equipo:
1 balanza electrónica
1 parrilla con agitador magnético


Procedimiento:
Bate la clara de huevo cruda en un litro de agua fría, y llévala hasta la ebullición, sin dejar de batir. Fíltrala. El líquido que se obtiene es una fina suspensión, muy estable, de albúmina desnaturalizada.
Prepara, por otro lado, jugo gástrico artificial, diluyendo en 100 ml de agua, 1 g de jugo gástrico desecado, que se vende en las farmacias bajo la denominación de “pepsina”, nombre que proviene de la enzima principal que contiene.



Prepara en cuatro tubos de ensayo, las siguientes mezclas:
*6 ml de albúmina + 6 ml de agua.
*6 ml de albúmina + 1,5 ml de agua + 4,5 ml de HCl, 0.1 N.
*6 ml de albúmina + 1,5 ml de pepsina + 4,5 ml de agua
*6 ml de albúmina + 1,5 ml de pepsina + 4,5 ml de HC1,  0.1 N.
A continuación coloca los tubos a baño María, a 40° C. Algunos minutos más tarde, únicamente en el tubo 4 se producirá un aclarado, esto es consecuencia de la actividad de la pepsina que, en medio ácido, ha hidrolizado a la albúmina.



Resultados:
Contenido del tubo
Reacción Biuret
Albúmina + agua
Negativa (rosa)
Albúmina + agua + ácido clorhidríco
Negativa (rosa)
Albúmina + pepsina + agua
Negativa (rosa)
Albúmina + pepsina + ácido clorhídrico
Positiva (rosa, pero se produjo un aclarado)


Análisis de resultados:
En la mezcla de: Albúmina + pepsina + ácido clorhídrico, la reacción de Biuret fue positiva, pues se presentó de color rosa que posteriormente se fue aclarando hasta que el color ya no se podía identificar a diferencia de las otras mezclas que permanecieron con el mismo color al estar en baño maría con una temperatura de 40°C. Esto se debe a que la pepsina, en primera instancia, se encontraba como una enzima inactiva pero al agregarle el ácido clorhídrico espontáneamente se transformó en una enzima activa, lo que permitió la hidrólisis de las proteínas, que en este caso sería la albúmina, rompiendo sus enlaces peptídicos a nivel de los aminoácidos fenilalanina y tirosina quedando como producto final: polipéptidos, los cuales son los reactivos específicos para la reacción de Biuret. Asimismo, esto es lo que sucede en la digestión química del aparato digestivo humano en el estómago, cuando la pepsina se activa gracias al ácido clorhídrico y ésta hidroliza a las proteínas del bolo alimenticio. Sin embargo, en las otras mezclas la reacción de Biuret fue negativa, puesto que los reactivos eran proteínas.


Discusión:
Dulce: Esta práctica nos permitió comprender cómo actúa la pepsina hacia las proteínas, lo cual me pareció muy bueno, ya que nunca había visto a la pepsina a pesar de ser industrial.


Marisol: Esta práctica me ayudo a entender lo importante que son las proteínas en los seres vivos y también que es la pepsina y como actúa sobre las proteínas.


Hazzel: Está práctica fue muy clara para observar que las enzimas son proteínas que degradan a su vez otras proteínas, y que para esto es escencial mantenerlas a temperatura corporal, para que actúe, sin embargo me parece que lo más importante aprender fue que la pepsina es una enzima que se encuentra en estado inactivo, y que para activarla necesita de una coenzima, que en esté caso sería el HCl. Además de mencionar que aprendimos que una proteína se degrada hasta formar polipéptidos y posteriormente aminoácidos.


Diana: Nos ayudo a entender el papel tan importante que tienen las enzimas en la degradación de las proteínas, y que algunas de ellas se encuentran en estado inactivo y necesitan de alguna sustancia y buenas condiciones como la temperatura y el pH. para poder actuar correctamente.


Replanteamiento de la hipótesis:
La pepsina es una pro-enzima inactiva, que al contacto con el ácido clorhídrico se convierte en una enzima activa que digiere a las proteínas, degradándolas así en sus unidades mas pequeñas que son los aminoácidos. Esto se logrará inferir si se realiza la mezcla de: albúmina + pepsina + ácido clorhídrico aplicándole la reacción de Biuret.


Conclusiones:
En conclusión se pudo inferir y comprobar cómo sucede la digestión química gástrica de las proteínas que sucede en el estómago del aparato digestivo humano, principalmente al hacer la mezcla de: albúmina + pepsina + ácido clorhídrico y observar lo que sucede al realizar la reacción de Biuret a baño maría con una temperatura de 40°C, donde la pepsina (enzima inactiva) al activarse espontáneamente, gracias al ácido clorhídrico, hidrolizó a las proteínas rompiendo sus enlaces peptídicos formando polipéptidos (reactivos específicos de la reacción de Biuret).



Bibliografía:
TOVAR, María Eugenia. Programa de biología III: ELABORACIÓN DE UN MODELO CONSTRUCTIVISTA DE ESTRATEGIAS DE APRENDIZAJE BASADAS EN IDEAS PREVIAS PARA LA ENSEÑANZA DE LOS CONCEPTOS BÁSICOS DE LAS ASIGNATURA DE BIOLOGÍA III.

jueves, 3 de noviembre de 2011

w de gowin Práctica 2: Acción de la amilasa sobre el almidón. Equipo 2, grupo: 523


Práctica 2: Acción de la amilasa sobre el almidón. Equipo 2, grupo: 523

https://docs.google.com/document/d/1oE4yEyz273RzWJ-7T2ogC3WaWBnFuf_Rf2siQC7XS9k/edit?hl=es&pli=1#

Universidad Nacional Autónoma de México
Colegio de Ciencias y Humanidades
Plantel sur
Práctica 2: Acción de la amilasa sobre el almidón.
Integrantes:
Contreras Flores Ericka Hazzel
Pérez Morales Dulce María
Quiroz Rojas Marisol
Biologia III
Profa. María Eugenia Tovar
Grupo: 523


Práctica 2: Acción de la amilasa sobre el almidón.
Preguntas generadoras:

  1. ¿Cómo actúa la amilasa sobre el almidón?
  2. ¿Cómo está formado el almidón químicamente?
  3. ¿Qué es la amilasa desde el punto de vista químico?
  4. ¿Cuál es papel que desempeña el almidón en los animales?
  5. ¿Por qué es necesario para los animales que la amilasa actúe sobre el almidón?
Hipótesis:
Al utilizar el almidón, que es un polisacárido, identificándolo por medio del lugol y al degradarse por la enzima amilasa, la cual se obtendrá por medio de una muestra de saliva, con ayuda del baño maría y la reacción de Benedict se podrá observar y comprobar cómo la amilasa hidroliza al almidón rompiendo sus enlaces que lo conformaban para producir glucosa y maltosa mostrándose a través de un precipitado rojo ladrillo.

Introducción:
En la digestión de los alimentos, es decir, en la degradación de las moléculas complejas para transformarlas en otras más sencillas, varias enzimas intervienen en dicha degradación, y es justo en este momento cuando inicia la digestión química.
La amilasa fue la primera enzima en ser identificada y estudiada por Anselme Payen, en 1833, quien la bautizó como diastasa.
La amilasa también conocida como ptialina o tialina, es una enzima que tiene la función de digerir el almidón y el glucógeno  para transformarlos en azucares más simples, el almidón es el polisacárido de reserva más abundante en los vegetales y es una fuente importante de azúcares para los animales dentro de los que se encuentra el hombre. Se estima que aproximadamente en un grano de almidón podemos encontrar hasta 7000 glucosas.  La estructura química del almidón permite que al penetrar el yodo en ésta se forme una disolución de color azul violácea intensa característica que permite la identificación positiva del almidón en una disolución.
El almidón puede hidrolizarse enzimáticamente por medio de la  amilasa que se encuentra formando parte de la saliva y el jugo pancreático. La amilasa rompe  los enlaces que constituyen al almidón y finalmente después de su acción deja glucosa libre y maltosa

Objetivos:
·          Identificar la acción de la amilasa de la saliva sobre el almidón
·          Identificar los productos de la acción de la amilasa sobre el almidón
·          Caracterizar la digestión enzimática realizada por la secreción de las glándulas salivales.

Material:
Papel filtro
Embudo
5 tubos de ensayo
2 goteros
2 cápsulas de porcelana
Material biológico:
Muestra de saliva
Sustancias:
Agua destilada
Almidón
Reactivo de Benedict
Reactivo de Lugol para almidón
Equipo:
Balanza electrónica
Parrilla con agitador magnético

Procedimiento:
A) Obtención de la enzima amilasa
Después de enjuagar la boca, mastica un trozo de papel filtro para estimular la salivación. Los líquidos segregados se pasan a un embudo que tenga un papel filtro, el filtrado se coloca en un tubo de ensayo hasta obtener 1ml. La saliva así obtenida se diluye empleando 1ml. de saliva y 10ml. de agua destilada , y es así como se obtiene la preparación de una enzima base.
Se prepara una solución al 2% de almidón, para lo cual se pesan 2 g de almidón y se disuelven en 100 ml de agua destilada
Se colocan 2 ml de agua destilada en un tubo de ensayo se le agregan 2 ml de la solución de almidón al 2% y 2 ml de la solución base de la enzima. En otro tubo se colocan 2 ml de agua destilada y se le agregan 2 ml de la solución de almidón al 2%.
Los tubos se colocan en baño maría a 37° C, durante 15 minutos dejando que la amilasa vaya hidrolizando al almidón
Una vez transcurridos los 15 minutos se sacarán los tubos del baño maría y se harán las pruebas del lugol y Benedict
B. Reacciones de lugol para almidón y Benedict
La prueba del yodo o el lugol permite identificar la presencia de almidón, con este reactivo se obtiene un color azul-violeta característico. Toma 1 ml de la disolución de cada uno de los tubos y añade unas gotas de lugol a cada una de ellas. Si no existe la hidrólisis del almidón la prueba será positiva.
La prueba de Benedict permite identificar a los azucares reductores. Toma 1 ml de cada uno de las disoluciones de los tubos y agrégales 1 ml del reactivo de Benedict, enseguida coloca ambos tubos en baño María, si existe hidrólisis del almidón se formará un precipitado rojo ladrillo que indica la presencia de azúcares como la glucosa y la maltosa.
Resultados:

Contenido del tubo
Reacción del lugol
Reacción de Benedict
Amilasa+almidón+agua
Positiva(morado)
Positiva(rojo)
Almidón+agua
Positiva (azul-violeta)
Negativa (azul)








Análisis de resultados:
La primera solución (amilasa+almidón+agua) en la reacción de Benedict se obtuvo un resultado positivo al tornarse en un precipitado rojo, lo cual indica la presencia de azucares reductores (glucosa y maltosa). Por lo tanto se comprobó y se pudo inferir cómo es la acción de la amilasa sobre el almidón al hidrolizarlo, es decir, lo degradó a azúcares simples produciendo glucosa y maltosa. Asimismo, se entendió la digestión química que sucede dentro de nuestra boca al ingerir alimentos, que son azúcares complejos o polímeros, y cómo la saliva (donde esta presente la enzima). Sin embargo, en la reacción de lugol se obtuvo un resultado negativo, pues el almidón estaba degradado en azúcares simples.

En la segunda solución (almidón+agua) la reacción de lugol fue positiva tornándose un precipitado azul-violeta, porque este reactivo indica la presencia del almidón, pero en la reacción de Benedict se obtuvo un resultado negativo al no haber ningún cambio en el color del precipitado y en su composición química.

Replanteamiento de la hipótesis:
El almidón, que es un polisacárido, se identificará por medio del lugol y al degradarse por la enzima amilasa, la cual se obtendrá por medio de una muestra de saliva, con ayuda del aumento de temperatura (baño maría) y la reacción de Benedict se podrá inferir y comprobar cómo la amilasa hidroliza al almidón rompiendo sus enlaces entre los azúcares que lo conformaban para producir glucosa y maltosa tornándose en un precipitado rojo ladrillo.

Conclusiones:
En conclusión gracias a esta práctica pudimos observar la reacción de la enzima amilasa sobre el almidón mediante diversas soluciones que nos permitían identificarla. De igual manera hemos aprendido después de realizar los experimentos que todas las enzimas únicamente  actúan a cierta temperatura, en este caso a la temperatura corporal que es aproximadamente de 37°C, puesto que a una temperatura más alta la amilasa se desnaturalizaría, y a temperaturas más bajas, simplemente no actuaría, ya que las enzimas son proteínas fundamentales en la digestión química, es decir, se encargan de degradar moléculas especificas . También aprendimos de manera empírica que la enzima amilasa se encuentra principalmente en las glándulas salivales, es por eso que tomamos la muestra de saliva.
Finalmente,  cabe resaltar que la amilasa en una enzima que degrada el almidón y el glucógeno, donde el primero al ser un polisácarido se degradará en azúcares más simples.

Bibliografía:
TOVAR, María Eugenia. Programa de biología III: ELABORACIÓN DE UN MODELO CONSTRUCTIVISTA DE ESTRATEGIAS DE APRENDIZAJE BASADAS EN IDEAS PREVIAS PARA LA ENSEÑANZA DE LOS CONCEPTOS BÁSICOS DE LAS ASIGNATURA DE BIOLOGÍA III.

Cibergrafía:
http://es.wikipedia.org/wiki/Amilasa. Fecha de consulta: 7 de octubre de 2011.
http://es.wikipedia.org/wiki/Almid%C3%B3n. Fecha de consulta: 7 de octubre de 2011

w de gowin Práctica no. 1: Patrones del aparato digestivo en los animales